Ratones Transgénicos
La transgénesis es un procedimiento
biotecnológico por el que se introduce un gen foráneo (transgén) en el
genoma de un ser vivo. En la transgénesis se busca que el transgén se
integre en la línea germinal (gametos) de una manera estable,
asegurando así que ese nuevo gen incorporado pueda ser heredado por la
descendencia.
Los ratones fueron los primeros
animales en los que se consiguió la transgénesis. En 1981, Gordon y
Ruddle demostraron la integración y transmisión estables (a través de
la línea germinal) de genes inyectados en pronúcleos de cigotos de
ratón obtenidos por fecundación “in vitro”. En 1982, Palmiter y col.
obtuvieron ratones transgénicos gigantes al inyectar en el pronúcleo de
un cigoto de ratón el gen de la rata que codifica la hormona del
crecimiento. Estos mismos investigadores, obtuvieron también ratones
transgénicos gigantes cuando el transgén introducido, que codificaba la
hormona del crecimiento, era de origen humano.
Un transgén es una construcción de ADN
que contiene: una secuencia que codifica una proteína específica que es
la que aporta la mejora genética deseada (exón); una región que
confiere a esta secuencia la capacidad de expresarse (promotor); y una
serie de secuencias aisladoras y reguladoras que protegen y modulan la
expresión del gen introducido.
Para conseguir una buena expresión del
gen de interés, es necesario incluir todas las secuencias que modulan
su expresión, de manera que se necesita un vector que admita grandes
transgenes. Para ello, se han desarrollado los transgenes genómicos,
basados en cromosomas artificiales de levaduras y bacterias, que son
capaces de transportar grandes fragmentos de DNA en los que se pueden
incluir todos los elementos reguladores del gen. Estos transgenes son
los YACs y los BACs (cromosomas artificiales de levaduras y cromosomas
artificiales de bacterias, respectivamente)
Las técnicas utilizadas para la producción de animales transgénicos son las siguientes:
- Microinyección pronuclear de transgenes en pronúcleos de óvulos fertilizados (cigotos).
- Vectores virales, que transfectan las células integrando en ellas su genoma previamente modificado (virus recombinantes).
- Transferencia de DNA exógeno mediada por esperma durante la fertilización (SMGT, “spermmediated gene transfer“).
- Inyección, en la cavidad de blastocistos, de células madre embrionarias (ES “cells”, “embrionic stem cells”) y/o células germinales embrionarias (EG, embrionic germ cells”), previamente modificadas genéticamente mediante la técnica de “gene targeting”.
- Transferencia nuclear (NT, “nuclear transfer”) con células
somáticas, ES o EG que previamente han sido modificadas genéticamente.
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